2025年白蛋白行業技術分析：精準分析技術確保白蛋白製品安全性

  在生物製藥領域，白蛋白作為一種關鍵的血液製品，其質量控制和精準分析技術一直備受關注。隨著生物技術的不斷演進，對於白蛋白的鑑定與定量方法也在持續革新。尤其是在2025年，行業內對白蛋白分析技術的準確性、高效性提出了更高要求，旨在確保白蛋白製品的安全性和有效性，滿足臨床救治危急、重症患者的廣泛需求。

  一、人血白蛋白的重要性與現行分析方法局限

  人血白蛋白來源於健康人血漿，在臨床上應用極為廣泛，可用於失血性創傷、燒傷休克、腦水腫、顱內壓升高、肝硬化及腎病腹水、低蛋白血症防治、新生兒高膽紅素血症、心肺復甦術、燒傷輔助治療、血液透析輔助治療以及呼吸窘迫綜合徵治療等諸多方面。

  《2025-2030年全球及中國白蛋白行業市場現狀調研及發展前景分析報告》指出，目前國內上市的人血白蛋白主要遵循《中國藥典》2020 年版(三部)標準。在鑑別方面，採用 「免疫雙擴散法」 和 「免疫電泳法」，然而這兩種方法對實驗人員技術要求高，檢驗周期長。在 「蛋白質含量」 測定上，使用 「凱氏定氮法」，存在步驟繁雜、操作複雜、結果易受操作環節和人為因素影響、分析效率低等問題。因此，開發一種安全、有效、快速、便捷的分析方法迫在眉睫。

  二、基於特徵肽液質聯用技術的新方案

  (一)儀器與試藥準備

  實驗選用了一系列先進儀器，如高效液相色譜 - 高分辨質譜聯用儀、高分辨質譜儀、納升液相系統、超純水儀、電子天平、冰箱、離心機、數顯恆溫水浴鍋等。試藥包括不同廠家及批次的人血白蛋白、特徵肽標準品、多種動物血清(豬、羊、馬、胎牛血清等)、甲酸、乙腈、胰蛋白酶等。

  (二)液相色譜質譜條件設定

  特徵肽段篩選條件

  色譜條件：以特定納升色譜柱為固定相，乙腈的甲酸水溶液和 98% 乙腈的 0.1% 甲酸水溶液為流動相進行梯度洗脫，進樣室溫度 7℃，進樣體積 2μL，分離泵流速 300 nL・min⁻¹。

  質譜條件：採用正離子模式，噴霧電壓 2.0kV，離子傳輸毛細管溫度 275℃，S - Lens 傳輸效率 60%，一級和二級質譜均用 Orbitrap 作為質量分析器，解析度 60000，採集範圍 350 - 1500(m/z)，二級質譜採用 Rapidspeed 模式掃描，利用 Top20 數據依賴模式選擇母離子，HCD 模式碎裂，碎裂能量 NCE 設為 28%。

  定性鑑別及定量分析條件

  液相色譜條件：以 Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈色譜柱為固定相，含 0.1% 甲酸水溶液和含 0.1% 甲酸乙腈溶液為流動相進行梯度洗脫，流速 0.2 mL・min⁻¹，柱溫 40℃，進樣量 2μL，進樣器溫度 8℃。

  質譜條件：電噴霧離子源(ESI)，正離子平行反應監測(PRM)模式，渦旋離子噴霧溫度 450℃，離子化電壓 4.5kV，碰撞室出口電壓 7V，入口電壓(EP)7V，特徵肽定性離子對兩對(m/z507.5→189.2 和 507.5→132.1)，碰撞能量分別為 20V、35V，去簇電壓均為 80V，選擇 m/z507.5→189.2 為定量離子對。

  (三)溶液製備流程

  特徵肽篩選樣品溶液：將待測樣品用碳酸氫銨溶液稀釋，加入胰蛋白酶，在具塞離心管中渦旋混勻，37℃水浴酶解過夜後，90℃高溫滅活 15min，經離心後取上清液稀釋備用。

  定性與定量分析方法學供試品溶液：對樣品進行一系列稀釋操作後，加入胰蛋白酶，酶解 16h，後續處理步驟與特徵肽篩選樣品溶液類似。

  定性與定量分析方法學專屬性溶液：對多種動物血漿進行稀釋，按照特定方法處理後取上清液。

  定性與定量分析方法學線性標準曲線溶液：精密稱取特徵肽標準品，經溶解、稀釋等操作製備成不同濃度的線性標準曲線溶液。

  (四)特徵肽篩選結果

  通過將樣品溶液注入納升液相高分辨質譜聯用儀，比對質譜資料庫並結合肽段篩選原則，最終確定胺基酸序列為 LVAASQAALGL 的特徵肽作為人血白蛋白的檢測特徵肽。該肽段與其他動物蛋白序列比對具有特異性，其二級質譜圖也呈現出獨特特徵。

  (五)酶解時間及酶用量優化

  酶用量優化：通過實驗發現，胰蛋白酶加入量在 20 - 80μL 範圍內離子對響應強度穩定，且在 20μL 時開始趨於穩定，綜合考慮選擇 40μL 進行後續實驗。

  酶解時間優化：酶解時間在 6 - 24h 範圍內較為穩定，且在 6h 時開始趨於穩定，最終選擇 16h 作為胰蛋白酶的酶解時間用於後續實驗。

  三、新方法的驗證與實際應用

  (一)方法學驗證

  專屬性試驗：分析結果顯示，人血白蛋白特徵肽保留時間為 5.1min，而豬、馬、牛、綿羊和山羊血清樣品在相同保留時間處未檢出特定離子對，表明該方法專屬性良好。

  線性與範圍：特徵肽在 12.5 - 100 ng・mL⁻¹ 濃度範圍內呈線性關係，線性回歸方程為 Y = 11598X + 20118，相關係數 r = 0.9964。

  檢出限與定量限：人血白蛋白特徵肽的檢出限濃度為 3.75 ng・mL⁻¹，定量限濃度為 2.5 ng・mL⁻¹。

  系統精密度試驗：連續進樣 6 針，特徵肽定量離子對的離子峰面積 RSD 為 2.4%，表明方法系統精密度良好。

  重複性試驗：同批人血白蛋白樣品製備 6 份進行分析，特徵肽平均濃度為 36.35 ng・mL⁻¹，RSD 良好，說明該方法重複性佳。

  回收率試驗：特徵肽回收率範圍在 92.31% - 99.72%，平均回收率為 94.95%，RSD 為 2.9%。

  穩定性試驗：36h 內，樣品溶液中特徵肽定量離子對峰面積 RSD 為 3.9%，表明樣品溶液穩定性良好。

  (二)樣品測定結果

  對兩個廠家6個批次的人血白蛋白樣品進行測定，以標準曲線法計算特徵肽含量，並與人血白蛋白理論蛋白質含量比較。通過特徵肽法和凱氏定氮法測得人血白蛋白含量比值為 0.90 - 1.05，兩種測定方法結果基本一致。

  四、總結

  在2025年白蛋白行業技術發展進程中，基於特徵肽液質聯用技術為白蛋白的鑑定與定量分析帶來了新的突破。該技術通過胰蛋白酶酶解人血白蛋白，篩選出穩定的靶向特徵肽 LVAASQAALGL，利用 HPLC - MS/MS 技術實現了對人血白蛋白種屬來源的精準確定以及含量的準確測定。新方法克服了傳統分析方法的諸多弊端，具有安全、準確、快速、簡便的優勢，為白蛋白質量控制提供了更為可靠的技術手段，有望在未來白蛋白生產和臨床應用中發揮重要作用，推動白蛋白行業技術水平邁向新的高度。

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