中國報告大廳網訊，隨著全球對食品安全和公共衛生的關注度不斷提升，2025年生化試劑行業呈現出快速增長的態勢。這一增長主要得益於生化試劑在食品安全檢測、微生物鑑定等領域的廣泛應用。特別是在李斯特氏菌屬的檢測中，生化試劑盒的開發和應用成為行業研究的重點。本文將探討基於數值鑑定法的李斯特氏菌屬生化試劑盒的研製及效果評價，分析其在提高檢測效率和準確性方面的優勢。
《2025-2030年中國生化試劑行業競爭格局及投資規劃深度研究分析報告》指出，李斯特氏菌屬(Listeria)是一種重要的食源性致病菌，其中單核增生李斯特氏菌(L. monocytogenes)是全球公認的四大食源性致病菌之一。該菌能夠引發嚴重的食源性疾病，對人類健康構成嚴重威脅。儘管只有單核增生李斯特氏菌能導致人類患病，但食品中非致病性李斯特菌的存在可作為潛在污染指標，提示存在致病性菌株交叉污染的風險。因此，開發高效、準確的李斯特氏菌屬檢測方法具有重要意義。
(一)數值鑑定法的理論基礎
數值鑑定法是一種融合傳統生化反應與現代計算機技術的快速檢測技術。它通過條件機率最大近似值模型，整合數學、電子、信息及自動化等多學科技術，完成細菌鑑定。該方法能夠快速準確地篩選樣本並進行推理分析，具有操作簡便、無需專業設備的特點，適合各類實驗室使用。
(二)生化試劑盒的設計與優化
在前期建立的李斯特氏菌數值鑑定系統的基礎上，設計並優化了微量化生化試劑配方，研製了半自動凍干數值鑑定生化試劑盒。該試劑盒包含12種微量化生化反應試劑，能夠有效區分李斯特氏菌屬內的17個種。通過優化生化反應組合與配方，確保了試劑盒的鑑定準確性和穩定性。
(三)生化試劑盒的使用方法
菌懸液的製備：將李斯特氏菌屬細菌接種至培養基中，培養後挑取單菌落，稀釋成0.5麥氏濁度的均勻懸浮液備用。
試劑盒的使用：將菌懸液注入試劑盒的分液槽中，平衡液面後使菌液均勻流入各反應孔，加入溶血試劑後置於36±1°C避光培養18-24小時。
結果分析：通過比色卡判讀生化反應條各孔的陰陽性結果，並結合數值鑑定軟體進行在線分析。
(一)標準菌株的鑑定結果
使用該生化試劑盒對11株李斯特氏菌標準菌株進行鑑定，結果均正確，鑑定準確率達到100%。鑑定百分數和T值均在99%以上，表明該試劑盒具有較高的鑑定準確性和可靠性。
(二)分離菌株的鑑定結果
對260株李斯特氏菌分離株進行鑑定，包括120株L. monocytogenes、130株L. innocua等，鑑定準確率達到99.23%。其中，2株菌株的鑑定結果與MALDI-TOF MS結果不一致，經API-Listeria和16S rRNA基因測序法驗證後，確認為鑑定錯誤。這表明該生化試劑盒在實際應用中具有較高的準確性和穩定性。
(三)穩定性和保質期實驗
批間穩定可重複性實驗：三次實驗結果一致，表明該試劑盒在不同批次間具有良好的穩定性。
保質期實驗：經塑封處理的試劑盒在4°C環境中存放240天後，檢測結果仍保持較高的準確性，證明其有效保存期為240天。
生化試劑行業現狀分析指出，與主流商品化試劑盒相比，該數值鑑定生化試劑盒在多個關鍵性能參數上具有顯著優勢。例如，該試劑盒僅需12個反應即可有效區分李斯特氏菌屬內的17個種，而商品化試劑盒通常需要更多的反應才能覆蓋較少的菌種。此外，該試劑盒的檢測成本僅為商品化產品的15.4%，顯著降低了檢測成本，提高了檢測效率。
本研究成功研製出集數值鑑定、半自動化生化試劑及在線分析軟體於一體的李斯特氏菌數值生化試劑盒。該試劑盒具有操作簡便、鑑定範圍廣、成本低廉等顯著優勢，為李斯特氏菌屬細菌的鑑定提供了一種高效、準確且經濟的新方法。在食品安全領域，該試劑盒能夠有效提高李斯特氏菌的檢測效率和準確性，為保障公共衛生安全提供了強有力的技術支持。未來，將進一步擴大菌株資料庫來源，優化鑑定方法，以提高試劑盒在複雜樣本檢測中的適用性，使其能夠更好地服務於食品安全、公共衛生及微生物學研究等多個領域。
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